1 消毒和灭菌的概念
消毒:是指用物理化学方法,杀灭培养料、物体表面及环境中的一部分微生物,只能杀死营养体,不能杀死休眠体和芽孢。
灭菌:是指在一定范围内用物理化学方法,彻底杀灭培养料内外、容器、用具和空气中的所有微生物营养体、休眠体和芽孢。
2 消毒和灭菌的方法
(1)紫外线杀菌:用 30~40w 紫外线管灯照射 20~30 分钟。
(2)甲醛和高锰酸钾混合熏蒸:一般每立方米需 40%甲醛 10毫升、高锰酸钾 7~8 克,进行熏蒸。
(3)使用消毒剂:用 0.1%升汞水浸过的纱布或海绵进行揩擦,或用喷雾器喷雾消毒,喷雾后 20~30 分钟,箱内的杂菌和雾滴一起落到箱底被杀死。
菌种保藏的方法:①斜面低温保存法:将斜面菌种,置于 4℃冰箱保存,以后每隔 2~3 个月转管移接一次。②液体石蜡保存法:注入一层已灭过菌的液体石蜡,使菌种与空气隔绝,降低其新陈代谢的活动,然后在棉塞外包以塑料薄膜,一般可保存一年以上。③木屑试管菌种保存法:用杂木屑按原种的培养基配制装入大号试管,容量为管高的 2/3,擦净管口塞紧棉塞,用牛皮纸包扎管口后高压灭菌,然后移入母种,在 25~28℃下培养,待长满菌丝后,立即移到低温干燥环境保存、或埋于尿素、硝酸铵或地洞中保存,效果更好,并能延长保存时间。④冷冻干燥保藏法:这种方法采用真空、干燥、低温等手段,使菌种新陈代谢活动处于相对静止状态,在低温下快速冷冻,又在低温下真空干燥,而使菌细胞的结构与成分保持原来状态而保存菌种。
此外,还有沙土保存法、液氮超低温保藏法、滤纸片保存法、菌丝球生理盐水保藏法、麦粒保藏法、干孢子真空保藏法等。