【上海博迅改良鸡胚培养法】,上海博迅-尊龙凯时app

材 料受精卵、碘酒、酒精消毒棉球、无菌平皿、1ml注射器、吸管、流感病毒悬液、石蜡、透明胶纸。2 传统方法将受精卵放38℃温箱中, 温箱中放一水盘, 受精卵气室向上, 每天翻动受精卵2次, 并且放风10min, 取孵育10~12d鸡胚, 在检卵灯下面出气室界线, 于胚胎附近无大血管处画出标记作为注射入口。将卵置于卵架上, 消毒标记处, 用无菌剪刀尖在标记处打一小孔。用灭菌注射器取流感病毒液0.2ml, 由小孔刺入0.5cm后, 进行注射。注射后, 用加热熔化的石蜡封孔, 置38℃温箱孵育。每日在灯下检视鸡胚情况 (若鸡胚在接种后24h内死亡为非特异性死亡, 应弃之) 。孵育3d后取出, 放4℃冰箱过夜, 次日取出鸡胚, 消毒气室端卵壳, 用无菌剪刀击破气室端卵壳, 用小镊子撕去卵膜, 并在无大血管处撕破, 以无菌毛细管吸取尿囊液, 放入无菌试管中待作血球凝集试验作病毒鉴定及进行传代培养。3 改良方法孵育3d后, 把受精卵外壳先碘酒后酒精消毒, 水平放置超净工作台上几分钟, 取一个直径150mm无菌培养皿, 加入少量无菌蒸馏水中, 把一个直径100mm培养皿内加入5~10ml bme坐在其中, 消毒后的受精卵壳在培养皿边缘敲碎, 卵内容物置于该培养皿中, 盖上皿盖。于37℃二氧化碳培养箱中培养, 培养7d后, 用无菌注射器吸取流感病毒悬液0.2ml, 避开大血管, 注入尿囊腔中, 每日进行检视鸡胚的死活, 如果鸡胚在接种后24h内死亡, 为非特异性死亡, 弃之。孵育3d后取出, 把培养皿内bme吸弃。用透明胶纸把培养皿四周封上, 放入4℃冰箱过夜, 次日取出鸡胚以无菌毛细吸管或注射器取尿囊液放于无菌试管中以备测定。4 讨 论该法与传统鸡胚培养法比较, 可以不受受精卵颜色、蛋壳薄厚的影响, 用不着每日翻动、放风受精卵, 注射病毒时胚胎大血管明显可见, 用不着在检卵灯下寻找, 坐标记收集病毒也比较方便, 但它受一定条件限制, 必须有二氧化碳培养箱, 该法也可应用于检测抑制血管形成的物质。